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实验一:切新鲜的小鼠肺

实验样品:小鼠肺(无病变)
所用设备:DTK-1000N振动切片机
实验步骤
1、活杀一只老鼠,解剖后露出完整肺部;
2、从支气管处注入2%的生理盐水冲洗肺部,直到整个肺呈现出白色状态;
3、从支气管处开始,取下整个肺,在支气管口处注入低温琼脂,直至充满全肺,再用生物线扎紧支气管,防止琼脂漏出(如图1);

*图1   充满琼脂的活体老鼠肺

4、将肺放在4度冰箱里保存12小时;
5、从冰箱取出肺,进行修块处理,修块的大小根据实验要求而定,一般为1 x 1cm左右;
6、将修好的肺组织粘在切片机的样品盘中,设置切片机振动频率为55Hz,进刀速度为20 mm/min,依次切出200μm和300μm的切片(如图2和图3)

*图2   200μm老鼠肺切片

 

*图3   300μm老鼠肺切片

实验结果:切片非常完整,肺泡、纤维等组织完整呈现出来,没有裂纹,活性保存很好。
 

实验二:切纤维化的人肺

1、实验样品:纤维化的人肺(换肺病人部组织)
2、所用设备:DTK-1000N振动切片机
实验步骤
1、取样,取样时需要避开严重纤维化的肺组织;
2、样品取出后浸泡在培养液(主要成分为氨基酸)中;
3、取出样品置于包埋管中,在包埋管里注入低温琼脂,然后将包埋管放在冰浴中,使琼脂快速凝固(如图4);
 

*图4   充满琼脂的活体肺

4、修块,去掉多余的琼脂;
5、将修好的肺组织粘在切片机的样品盘中,设置切片机振动频率为50,进刀速度为20mm/min,依次切出200μm和300μm的切片(如图5和图6)

*图5   200μm肺切片

*图6   300μm肺切片

实验结果:切片非常完整,肺泡、纤维等组织完整呈现出来,没有裂纹,活性保存很好。
总结:
老鼠肺可以被完整取下,所以可以采用从支气管处注入琼脂的方式来固定,这种固定方式的好处是不会阻断空气中的氧气进入肺循环,从而极大的增加了肺细胞的活性。而对于人体肺,取样时不能取出整个肺,无法采用往肺内灌注琼脂的固定方式,只能采用包埋管包埋的外部固定。这要求实验员非常快速的完成整个实验操作过程,否则,如果让肺泡和氧气阻断时间久了,肺细胞将会失去活性。另外,选择性能优良的振动切片机,切片时设置合适的振动频率和进刀速度,也是确保高活性切片的极为重要的因素。
 
DTK-1000N振动切片机
主要用于切割没有冰冻的新鲜或固定好的动植物组织,尤其适合脑组织的切片